甲基绿又称双绿SF,属于碱性染料,是具有金属光泽的绿色微结晶或粉末,分子量为608.78,分子式为C27H35Cl4N3Zn。 Methyl Green Stain (0.1%)在组织或细胞染色中对细胞核进行染色,常用于鉴定DNA,细胞核中的DNA遇甲基绿会被染成蓝绿色,亦可用于免疫荧光染色或免疫组化染色。10ml染色液可以染色20个样本。
有效期:室温避光保存,6个月有效。
自备材料:
1、4%多聚甲醛
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考) :
1、样品处理
(1)对于石蜡切片:
二甲苯中脱蜡5~10min。更换新鲜的二甲苯,再脱蜡5~10min。无水乙醇5min。90%乙醇2min。 70%乙醇2min。蒸馏水2min。
(2)对于冰冻切片:
蒸馏水2min。
(3)对于培养细胞:
用4%多聚甲醛固定10min以上。 蒸馏水洗涤2min。更换新鲜的蒸馏水,再洗涤2min。
2、甲基绿染色
(1)对于上述处理好的样本,用Methyl Green Stain染色5~10min。
(2)用蒸馏水冲洗2次,此时样本呈蓝色。
(3)95%乙醇处理5s。
(4)用70%乙醇洗涤2次,直接观察或按下列组织切片操作步骤进行。
3、组织切片染色
(1)95%乙醇脱水2min。
(2)更换新鲜的95%乙醇再脱水2min。
(3)二甲苯透明5min。
(4)二甲苯透明5min。
(5)中性树胶或其它封片剂封片。
(6)显微镜下观察,细胞核呈绿色或蓝绿色。
4、荧光染色
(1)如果进行免疫荧光染色,在甲基绿染色液染色后,70%乙醇洗涤2次,每次2min。
(2)95%乙醇脱水2min。
(3)PBS或生理盐水或TBS等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。
(4)进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。
染色结果:细胞核呈绿色或蓝绿色。
注意事项:
1、首次使用本染液时建议先取1~2个样品做预实验。
2、甲基绿染色可以根据染色结果和要求调整时间。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
备注:以上数据均来自公开文献, 仅供参考。