Hoechst 33342染色液（1mg/mL） RY1141

Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342 或HOE 33342，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342 也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA 染色。Hoechst 33342 的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342 和双链DNA 结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。

Hoechst 33342 染色液浓度为1mg/mL，使用前请先稀释至实验所需浓度，再行使用。稀释后的工作液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

操作步骤（仅供参考）：

Hoechst 33342染色工作液配制：

使用前用生理盐水或PBS 将Hoechst 33342 染色液稀释100倍，即为工作液。

1. 对于固定的细胞或组织：

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342 染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342 染色。

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342 工作液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3 倍体积的工作液，混匀。室温放置3-5 分钟。

c. 吸除Hoechst 33342 染色液，用TBST、PBS 或生理盐水洗涤2-3 次，每次3-5 分钟。

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：

a. 加入适当量Hoechst 33342 工作液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1mL工作液，对于96 孔板一个孔需加入100μL 工作液。

b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30 分钟。弃染色液，用PBS 或培养液洗涤2-3 次即可进行荧光检测。

注意事项：

1. 荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量

当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3.-20℃避光保存，一年有效

备注：以上数据均来自公开文献, 仅供参考。