磷酸化蛋白提取试剂盒 SH6140

试剂盒内容：

产品简介：

本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为强烈，可获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。

操作步骤：

1、组织总蛋白的提取

1) 在1mL 的冷裂解液中各加入10μL 的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用；

2) 称取0.1g 的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1mL 的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作；

3) 将组织匀浆液移入1.5mL 的EP 管中，4 ℃ 12000g 离心30min；

4) 吸取上清至新的管中；

5) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）

2、细胞总蛋白的提取

1) 裂解液的用量：107 个细胞需要裂解液1mL；

2) 贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS 洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP 管中，颠倒裂解20-30min。

3) 悬浮细胞：4℃ 400g 离心收集细胞，用冷的PBS 洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3-4 次；

4) 裂解完毕之后，将细胞裂解液4 ℃12000g 离心30min；

5) 将上清移入新的EP 管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）

注意事项：

1. 实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境；

2. PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解；

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

备注：以上数据均来自公开文献, 仅供参考。