核蛋白提取试剂盒 SH6160

规格：50T/100T

有效期：核/浆蛋白抽提试剂 4℃保存，PMSF 于-20 ℃保存

产品内容：

产品简介：   

本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约 2×106个Hela细胞或40mg组织）。

操作方法： 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

1、对于体外培养细胞：

2、根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入 DTT 至终浓度 0.5mM。

3、对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。

4、对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

5、每20μL细胞沉淀加入200μL浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL或40mg）。

6、用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。

7、冰浴10分钟。

8、最高转速剧烈涡旋10秒，4℃ 12000～16000g 离心10分钟。

9、上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的 PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩  (推荐使用: 货号EX6150胞浆蛋白提取试剂盒)。

10、沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入50-100μL核蛋白抽提试剂。

11、用移液器吹打或高速涡旋 15 秒（可适当延长）至沉淀完全分散，冰浴10分钟。

12、最高转速剧烈涡旋 10 秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。

13、立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。

二、对于组织样品：

把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每 50mg 组织加入 200μL-500μL PBS，用匀浆器 冰上匀浆制成细胞悬液，500 g 离心 2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入 200μL 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。

注意事项：

1、裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

2、对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

备注：以上数据均来自公开文献, 仅供参考。