Hoechst 33258 染色液(即用型) RY0667

Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。 Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33258 的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链 DNA 结合后，最大激发波长为 352nm，最大发射波长为461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

保存：-20℃避光保存，一年有效。

使用说明：

1. 对于固定的细胞或组织：

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33258 染色。

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c. 吸除 Hoechst 33258 染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：

a. 加入适当量 Hoechst 33258 染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入 1ml 染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项：

1、荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

备注：以上数据均来自公开文献, 仅供参考。