Fluorescein diacetate 二乙酸荧光素 CAS: 596-09-8 GD5919

英文名称: Fluorescein diacetate

别名: 荧光素二乙酸酯；3,6-Diacetoxyfluoran；Di-Oacetylfluorescein；

CAS: 596-09-8　

分子式: C24H16O7　

分子量: 416.38　

Ex (nm): 494　

Em (nm): 521　

外观: 微黄色结晶粉末

保存条件: -20℃，有效期12个月。本产品仅用于科研，不可用于其他。

FDA（荧光素二乙酸酯）是一种非荧光疏水性荧光素衍生物，可以通过细胞膜（包括哺乳动物和细菌细胞），因此细胞内酯酶水解产生高荧光产物荧光素的二乙酸酯基团。荧光素分子在具有完整膜的细胞中积累，作为细胞活力的标记。不具有完整细胞膜或活性代谢的细胞可能不会积聚荧光产物，因此不会表现出绿色荧光。FDA可以与PI染色组合使用，因为非活细胞摄取PI并将死细胞染成红色，而活细胞不吸收PI并且应该仅染色绿色。与单色分析相比，非活细胞和活细胞的这种双色分离可以提供更准确的细胞活力定量。

实验操作（仅供参考）:

1. 准备2-10mM DMSO 储备液

将4.2mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于~2.4mM）

注意：应立即使用原液; 应将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。 避免反复冻融循环，避免光照。

2.准备染料工作液

在使用之前，通过用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH7）稀释步骤1中的DMSO储备溶液，准备1至20μM染料工作溶液。通过涡旋混合均匀。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物细胞培养一段所需的时间。

3.2离心细胞，每管2-10×105个细胞。

3.3在500μL染料工作溶液中重悬细胞（来自步骤2）。

3.4在室温或37°C下用染料溶液孵育细胞15至30分钟，避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，得到每管2-10×105个细胞。

3.6用流式细胞仪（FL1通道）或荧光显微镜观察Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。

注意：对于细菌细胞染色：当通过测试细菌过夜生长预处理的营养肉汤中1：800稀释储备溶液时，染色是最有效的，但也可以使用新鲜营养肉汤或PBS。 细菌悬浮液应用PBS稀释至每毫升105-107个生物。 可以通过将1ml溶液施加到.45μm过滤器（25mm）并真空过滤除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室温下孵育5-10分钟来染色细菌。

注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

备注：以上数据均来自公开文献, 仅供参考。