Western及IP细胞裂解液（带PMSF）WB2134

Western 及 IP 细胞裂解(无抑制剂)使用说明书 

规格：100mL/500mL，本产品配有一支 PMSF（1.5mL） 

保存：2-8℃保存，有效期 1 年，长期保存可置于-20℃。 

产品简介： Western 及 IP 细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)，是一种在非变性条 件下裂解细胞或组织样品从而制备蛋白样品的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞或组织样品， 可以用于 PAGE， Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等，使用本裂解液时，用户可以根据 具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。产品主要成分为 Tris-cl，NaCl，Triton X-100，不含蛋白酶、磷 酸酯酶等抑制剂。在添加蛋白酶抑制剂的情况下，可以有效维持原有的蛋白间相互作用。 

使用说明（仅供参考）： * 根据使用量，取每 1 mL 裂解液加入 10 μL PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。 

1、样品前处理：

 a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。冰上放置裂解 5-10 分钟。 

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例 加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 

c）对于细菌或酵母：对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，使用 PBS 洗涤一次，充分去除液体后，用手指 把细菌或酵母尽量弹散。加入 150-250ul 裂解液，用手指弹击管底以混匀，冰上裂解 2- 10min。如果想要获得更好 的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。

 d)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20 毫克组织加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 

2、后处理： 充分裂解后，将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀、免疫共沉淀等实验操作。 

注意事项： 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上 或 4℃进行。裂解时间可根据实验要求进行优化处理。 Western 及 IP 细胞裂解液(无抑制剂)裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。 由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。