规格:1ml /1ml×5
保存:-20℃保存,有效期12个月,4℃短期保存一周,避免反复冻融。
PCR MasterMix包含三种酶(Taq,Pfu,Taq plus),每种酶对应着两种PCR MasterMix(含染料和不含染料),一共六种PCR MasterMix。
Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,其扩增速度约为1-2kb/min。扩增碱基出错率为10-5左右。其产物未端带有A,可直接用于TA克隆。
Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。其扩增速度约为500bp/min左右。其产物为平未端,须加A后才可用于TA克隆。
Taq Plus:Taq和Pfu的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。其扩增速度约为1000bp/min左右。其产物未端带有A,可直接用于TA克隆。
含染料PCR MasterMix反应完后可以直接电泳检测。不含染料的PCR MasterMix反应完后加入上样缓冲液后电泳检测。
产品组成(2×):
20 mM Tris-HCl (pH 8.3)
100 mM KCl
3mM MgCl2
500μM dNTP each
0.1U Polymerase/μl
ddH2O
其它稳定剂和增强剂
应用举例:
按下面配制50ul PCR反应体系
Template <1μg
Primer1(10uM) 2μl
Primer2(10uM) 2μl
2×MasterMix 25μl
ddH2O up to 50μl
PCR反应循环设置
94℃ 3min
94℃ 30sec
55℃ 30sec 30 cycles
72℃ 500-2000bp/1min
72℃ 5min
结果检测:反应结束后,取5μl反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
备注:以上数据均来自公开文献, 仅供参考。